摘要:本论文从土壤中分离菌落，以稀释法获得单菌落。使用筛选培养基，根据透明水解圈大小，判断产酶情况，获得耐碱性产蛋白酶较高菌株。通过PCR方法获得菌株16S rDNA序列，送到生物公司测序，拼接获得全序列，对菌株进行初步分类。将菌株的16S rDNA序列提交到美国国立生物信息中心（NCBI），获得NCBI Gene Bank number。分析其16S rDNA序列的同源性，对菌株进行鉴定，确定菌株为Pectobacterium sp和Bacillus sp。

关键词 碱性蛋白酶；16S rDNA；Pectobacterium；Bacillus

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 碱性蛋白酶的研究和应用-1

1.1.1 产碱性蛋白酶主要菌种-1

1.1.1.1高产菌种的选育方法-1

1.1.2 碱性蛋白酶的定义-1

1.1.2.1 碱性蛋白酶的分类和性质-1

1.1.3 碱性蛋白酶的基因结构和功能-2

1.1.4 研究现状-3

1.1.4.1国外研究现状-3

1.1.4.2国内研究现状-3

1.2 本研究的意义-3

2实验材料与方法-5

2.1实验材料-5

2.1.1菌株-5

2.1.2 药品-5

2.1.3主要仪器设备-5

2.2培养基的配置-6

2.2.1高压灭菌及操作台的消毒-6

2.3菌株的筛选纯化-6

2.3.1菌株保藏-7

2.3.2菌种的活化-7

2.4透明圈法筛选-7

2.5细菌16S rDNA序列分析-8

3结果与讨论-10

3.1实验结果-10

3.1.1 筛选到耐碱性产蛋白酶活性较高菌株-10

3.1.2 16SrDNA序列的测定和分类分析-10

3.2讨论-13

3.2.1 基因组DNA的提取-13

3.2.2产酶菌株的分析-13

结论-15

致谢-16

参考文献-17