摘 要:采用酶联免疫吸附的反应原理，以沙门氏菌适配体代替抗体，沙门氏菌适配体特异性的识别和结合沙门氏菌。最终通过纳米金与过氧化氢反应的显色情况直接检测出是否有沙门氏菌存在。首先，将生物素标记的沙门氏菌适配体通过生物素-亲和素的结合固定在酶标板的表面。然后，将沙门氏菌、生物素化的适配体、亲和素-过氧化氢酶连接物、过氧化氢依次引入到酶标板中。其中，过氧化氢酶可消耗过氧化氢。最后，加入新鲜配制的氯金酸溶液，反应产物的颜色将改变，通过呈现的颜色是蓝色或红色来判断是否存在沙门氏菌，另可以用酶标仪检测反应后溶液在波长为550 nm处的吸光度值进行定量分析。在优化条件下，沙门氏菌浓度在10-106 cfu/mL的范围内时，溶液在波长为550 nm处的吸光度与菌液浓度呈线性关系。最低检测限为9 cfu/mL。

关键词：沙门氏菌；适配体；纳米金；酶联免疫吸附反应（Elisa反应）

目录

摘要

ABSTRACT

第1章 绪论-1

1.1 沙门氏菌-1

1.1.1 沙门氏菌的介绍-1

1.1.2 沙门氏菌的有关检测新进展-1 

1.2 酶联免疫吸附反应（Elisa）-3

  1.2.1 酶联免疫吸附反应（Elisa）的相关介绍-3

  1.2.2 酶联免疫吸附反应（Elisa）在沙门氏菌检测中的应用-3

1.3 适配体的相关介绍-4

1.4 纳米金在检测材料中的应用-5

  1.5 本课题的立题意义与研究内容-5

1.5.1 本课题立体意义-5

1.5.2 本课题的研究内容-6

第2章 实验材料、设备及方法-7

2.1 材料与主要试剂-7

2.2 主要仪器-7

2.3 实验方法-7

2.3.1 相关实验原料的准备-7

  2.3.1.1 缓冲液的配制-7

  2.3.1.2 菌液-8

  2.3.1.3 沙门适配体-9

  2.3.1.4 亲和素-9

  2.3.1.5 BSA溶液-9

  2.3.1.6 氯金酸溶液-9

2.3.2 亲和素-过氧化氢酶连接物的制备-9

2.3.3 确定过氧化氢与氯金酸反应的浓度-11

2.3.4 酶标板上微量加样分析-11

第3章 实验结果与讨论-13

3.1 实验原理-13

3.2 结果分析-13

3.2.1 亲和素-过氧化氢酶连接物制备表征-14

3.2.2 过氧化氢浓度的优化与选择-15

3.3 实验条件优化-17

3.3.1 沙门适配体浓度的优化-17

3.3.2 亲和素-过氧化氢酶连接物的浓度优化-17

3.3.3 BSA的浓度优化-18

3.3.4 检测时间的优化-19

3.4 分析性能-20

第4章 结论与展望-21

4.1 结论-21

4.2 不足之处及展望-21

参考文献-23

致  谢-25