摘要:本研究采用具有降解有机磷农药特性的微生物黄杆菌（Flavorbacterium. sp A TCC27551），其含有的pDL2质粒携带编码有机磷水解酶opd基因。因为黄杆菌本身的遗传背景不甚明了，难于直接构建基因工程菌，所以将质粒pDL2携带的opd基因改造后导入E.coli，方便提纯和检测，为进一步构建广谱的农药降解菌提供基础及依据。

　　　以抽提的黄杆菌质粒pDL2为模板PCR扩增出opd基因全长片段，通过PCR产物与载体连接并转入感受态细胞内，通过蓝白斑筛选，以白斑菌落PCR扩增，电泳验证，确定转化成功。从而将黄杆菌质粒上的一段长达1098bp的opd基因进行扩增及克隆，获得方便opd基因提纯和检测的菌株。

关键词  黄杆菌；opd基因；克隆与鉴定

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 有机磷农药概况-1

1.1.1 有机磷农药定义及其分类与特点-1

1.1.2 有机磷农药的使用现状-2

1.1.3 有机磷农药的危害-2

1.1.4 有机磷农药的降解方法-3

1.2微生物降解技术-3

1.2.1微生物降解技术原理-3

1.2.2 微生物降解技术研究概况-3

1.3 本论文研究的目的及意义-4

2 材料与方法-5

2.1 实验试剂与仪器-5

2.1.1 实验试剂-5

2.1.2 实验仪器-5

2.1.3 实验材料-5

2.2 实验方法-6

2.2.1培养基及菌体活化-6

2.2.2 黄杆菌质粒提取-6

2.2.3 opd基因扩增及电泳验证-8

2.2.4 PCR结果测序-9

2.2.5 opd基因克隆与转化-9

2.2.6 转化结果验证-10

3 结果分析-11

3.1 质粒抽提结果-11

3.1.1 碱裂解法微量抽提质粒结果-11

3.1.2 碱裂解法大量抽提质粒结果-12

3.2 opd基因扩增-12

3.2.1菌落PCR结果-12

3.2.2菌悬液PCR结果-13

3.3测序结果分析-13

3.3.1黄杆菌质粒上完整的opd基因-13

3.3.2 测得序列-14

3.4 克隆与转化-16

3.4.1 蓝白斑筛选-16

3.4.2 转化结果验证-16

结论-18

致谢-19

参考文献-20