摘要:本实验以食品生物工程实验中心酶工程实验室所保藏的黑曲霉菌株作为菌源，对黑曲霉所产的内切型菊粉酶的酶学性质进行了研究。

　　　首先对20株黑曲霉菌株进行筛选，通过发酵培养测定酶活，最终筛选出一株酶活最高的菌株E133131号，其酶活为0.66U/mL。

　　　对黑曲霉E133131号菌株所产菊粉酶进行了酶学性质的研究，得到以下结论：最适pH为4.5；最适温度为60℃；最佳底物浓度为4mmol/L；米氏常数（Km）为1.434mmol/L；Ca2+对菊粉酶有激活作用，当加入浓度为1.5mmol/L的Ca2+时，使酶活从0.66U/mL提高到1.09U/mL，Mn2+、Cu2+和Mg2+对内切型菊粉酶有抑制作用，其中Cu2+的抑制作用最大，使酶活从0.66U/mL降低到0.095U/mL，Na+、 K+、 Zn2+、 Fe2+、 Mg2+对菊粉酶的酶活影响不大；pH在5.0～8.0范围内，温度在50～60℃之间菊粉酶活力较稳定。

关键词 内切型菊粉酶；酶学性质；黑曲霉；底物浓度；米氏常数

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 菊粉酶的简介-1

1.1.1 菊粉酶的来源-1

1.1.2 菊粉酶的概念-1

1.1.3 菊粉酶的分类-1

1.1.4 菊粉酶的性质-1

1.1.5 菊粉酶的主要应用-2

1.2 本课题的主要内容及研究意义-3

2 实验材料与方法-5

2.1 实验材料-5

2.1.1 牛蒡-5

2.1.2 菌种-5

2.2 仪器与设备-5

2.3 主要试剂-5

2.4 培养基-7

2.4.1 初筛培养基-7

2.4.2 诱导培养基-7

2.4.3 发酵培养基-7

2.4.4 查氏培养基-7

2.5 实验方法-8

2.5.1 牛蒡汁的制备-8

2.5.2 菊糖溶液的制备-8

2.5.3 葡萄糖标准曲线的建立-8

2.5.4 内切型菊粉酶酶活力测定方法-9

2.5.5 黑曲霉菌株的活化-9

2.5.6 菊粉酶粗酶液的制备-10

2.5.7菊粉酶酶活最高菌株的筛选-10

3 结果与分析-11

3.1 标准曲线的绘制-11

3.2 酶学性质的研究-11

3.2.1 pH值对菊粉酶活力的影响-11

3.2.2 温度对菊粉酶活力的影响-12

3.1.3 反应时间对菊粉酶活力的影响-13

3.1.4 金属离子对菊粉酶活力的影响-14

3.1.5 底物浓度对菊粉酶活力的影响-15

3.1.6  I/S值的测定-16

3.1.7 米氏常数Km和最大反应速度的测定-17

3.3 酶的稳定性的研究-19

3.3.1 pH值对菊粉酶稳定性的影响-19

3.3.2 温度对菊粉酶稳定性的影响-19

结论-21

致谢-22

参考文献-23