摘要:本文采用灵芝深层发酵技术，用0.03% LiCl诱变灵芝原生质体，发酵培养，测定胞外三萜含量，探讨酶法提取胞外三萜条件，同时进行扩大试验。结果表明：出发株胞外三萜含量为107.772ug/mL,经0.03% Licl诱变后胞外三萜含量为436.530ug/mL，诱变后比出发菌株三萜含量提高3倍。胰蛋白酶提取胞外三萜最适条件为加酶量6.0%、酶解时间80min、酶解温度40℃、pH 8.0。扩大试验：罐压在0.05MPa左右，转速150r/min，通气量在1050L/h，温度在25℃-27℃之间，培养6-9天。3-7天菌种生长较快，然后趋于平缓，三萜含量可达403.254ug/mL，比出发菌株提高2.7倍。

关键词灵芝；诱变；氯化锂；三萜类化合物；扩大试验

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

 1.1 灵芝的概况-1

1.1.1 灵芝的化学成分-1

1.1.2灵芝三萜的结构及功能-1

 1.2 诱变的原理和概念-2

1.2.1 原生质体-2

1.2.1.2原生质体技术-2

1.3 原生质体诱变方法-3

 1.3.1 诱变育种的概念-3

 1.3.2诱变育种的分类-3

1.4灵芝三萜的提取与检测-3

 1.4.1灵芝三萜的提取方法-3

 1.4.2灵芝三萜的检测方法-4

1.5 本课题研究内容及意义-5

2 材料与方法-6

2.1 实验材料与仪器-6

 2.1.1 试验菌种-6

 2.1.2 培养基-6

 2.1.3 试剂-6

 2.1.4 仪器设备-7

2.2 实验方法-7

 2.2.1 灵芝菌种的活化与培养-7

 2.2.2原生质体的制备-7

 2.2.3 原生质体的诱变与再生-8

 2.2.5灵芝三萜的测定-8

 2.2.6 酶法提取胞外三萜含量-9

 2.2.7 扩大试验-10

3 结果与讨论-12

3.1灵芝菌种发酵液三萜含量的测定-12

3.2酶法提取胞外三萜含量-12

 3.2.1酶种类的选择-12

 3.2.2胰蛋白酶提取胞外三萜-14

 3.3.1酶解时间对三萜提取影响-14

 3.3.2 pH对三萜提取影响-14

 3.3.3 酶液浓度对三萜含量影响-15

 3.3.4 温度对三萜提取的影响-15

 3.4扩大试验中灵芝发酵液三萜含量的测定-16

结论-18

致谢-19

参考文献-20